细菌的转化与平板筛选！

2017-08-25 20:15:14 来源:

感受态是指细菌处于容易吸收外源DNA的状态。转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导人细菌的进程。其原理是细菌处于0℃，CaCl2低渗溶液中，细菌的转化与平板筛选，菌细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA构成抗DNA酶的羟基—钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热击处理，增进细胞吸收DNA复合物。将细菌放置在非选择性培养基中保温1段时间，促使在转化进程中获得的新的表型（如Ampr等）得到表达，然后将此细菌培养物涂在含有氨苄青霉素的选择性培养基上。

重组质粒转化宿主细胞后，还需对转化菌落进行挑选鉴定。利用α互补现象进行挑选是最常常使用的1种鉴定方法。现在使用的许多载体都具有1段大肠杆菌β半乳糖苷酶的启动子及其编码α肽链的DNA序列，此结构称为lacZ'基因。lacZ'基因编码的α肽链是β半乳糖苷酶的氨基真个短片断（146个氨基酸），细菌的转化与平板筛选。任何携带着lacZ'基因的质粒载体转化了染色体基因组存在着此种β半乳糖苷酶突变的大肠杆菌细胞后，便会产生出有功能活性的半乳糖苷酶，在IPTG（异丙基β—D—硫代半乳糖苷）引导后，在含有Xgal（5-溴⑷-氯⑶-吲哚⑹-D-半乳糖苷）的培养基平板上构成蓝色菌落（半乳糖苷酶能将无色的化合物Xgal切割成半乳糖和深蓝色的底物5-溴⑷-靛蓝）。而当有外源DNA片断插入到位于lacZ'中的多克隆位点后，就会破坏α肽链的浏览框，从而不能合成与受体菌内突变的β半乳糖苷酶相互补的活性α肽，而导致不能构成有功能活性的β半乳糖苷酶，也就不能分解Xgal而显蓝色，因此含有重组质粒载体的克隆常常是白色菌落医学`教育网搜集整理。